PCR基因擴增儀采用專(zhuān)有的技術(shù),有效避免了熱傳導的邊緣效應問(wèn)題,為PCR實(shí)驗提供溫度均一性,確保實(shí)驗結果的可靠性和重復性,溫控系統,模式顯示金屬模塊的溫度變化,能模擬試管內試劑的溫度變化,甚至考慮到了PCR反應體系對溫度變化的影響,模塊具有溫度梯度功能,為前沿科研工作者提供30℃的溫度梯度范圍,滿(mǎn)足苛刻的優(yōu)化實(shí)驗需求。
PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴增,加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復“變性→退火→引物延伸”過(guò)程至25~40個(gè)循環(huán),呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。PCR擴增時(shí)加入的引物利用熒光素進(jìn)行標記,使引物和熒光探針同時(shí)與模板進(jìn)行特異性結合,擴增結果通過(guò)熒光信號采集系統實(shí)時(shí)采集信號并輸送到計算機分析處理系統,實(shí)時(shí)輸出量化結果,這樣的PCR儀叫實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
PCR基因擴增儀不僅擁有30℃的寬限梯度功能,可用來(lái)優(yōu)化實(shí)驗條件,滿(mǎn)足苛刻的實(shí)驗需求,同時(shí)延續了“USB”和聯(lián)機聯(lián)網(wǎng)功能,在之前基礎上,增加了LCD彩色觸摸屏,使實(shí)驗的顯示和操作更為清晰和直接。
PCR基因擴增儀的PCR由變性、退火、延伸三個(gè)基本反應步驟構成。
1.模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
2.模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
3.引物的延伸:DNA模板-引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環(huán)變性、退火、延伸三過(guò)程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時(shí)就能將待擴增的目的基因擴增放大幾百萬(wàn)倍。