說(shuō)一說(shuō)T100基因擴增儀由哪三個(gè)基本反應步驟構成

更新時(shí)間：2021-06-25

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　　T100基因擴增儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。

　　本質(zhì)是體外核酸擴增，加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復“變性→退火→引物延伸”過(guò)程至25～40個(gè)循環(huán)，呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。

　　擴增時(shí)加入的引物利用熒光素進(jìn)行標記，使引物和熒光探針同時(shí)與模板進(jìn)行特異性結合，擴增結果通過(guò)熒光信號采集系統實(shí)時(shí)采集信號并輸送到計算機分析處理系統，實(shí)時(shí)輸出量化結果，這樣的PCR儀叫實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

　　T100基因擴增儀的操作非常簡(jiǎn)便，接通電源，儀器自檢，設置溫度程序或調出儲存的程序運行即可。

　　T100基因擴增儀技術(shù)的原理類(lèi)似于DNA的天然復制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于靶序列兩端互補的寡核苷酸引物，由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應步驟構成。

　　1、模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。

　　2、模板DNA與引物的退火：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈互補序列配對結合。

　　3、引物的延伸：DNA模板-引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。

　　重復循環(huán)變性-退火-延伸三過(guò)程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一輪循環(huán)需2~4分鐘，如此反復進(jìn)行，每一輪循環(huán)所產(chǎn)生的DNA均能成為下一輪循環(huán)的模板，每一輪循環(huán)都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區拷貝數擴增1倍，PCR產(chǎn)物以2的指數形式迅速擴增，經(jīng)過(guò)25~30輪循環(huán)后（2~3小時(shí)），理論上可使基因擴增109倍以上，實(shí)際上一般可達106~107倍。