普通PCR 梯度PCR 熒光定量PCR儀的區別及運用

PCR：即合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)，利用DNA在體外95℃時(shí)解旋（變性），55℃時(shí)引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合（退火），再調溫度至72℃左右，DNA聚合酶沿著(zhù)磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈（延伸）。

PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。

根據DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為：普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等幾類(lèi)

普通PCR儀：

一般把一次PCR擴增只能運行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀，稱(chēng)之為普通PCR儀，也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。

   普通PCR儀主要應用于科研、教學(xué)、臨床醫學(xué)、檢驗、檢疫等。

如:啟步BSW-2P,BSW-3P,BSW-6P-I/II ,ABI 2720型

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梯度PCR儀：

一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱(chēng)之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其的退火溫度不同，通過(guò)設置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴增，從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的退火溫度進(jìn)行有效的擴增。

    梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增，這樣既節約時(shí)間，也節約成本。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。梯度PCR儀多應用于科研、教學(xué)機構,檢驗、檢疫等。

如:啟步BSW-2T,BSW-3T,BSW-6T-I/II ,ABI 9700,ABI Veriti, Bio-Rad T100 PCR儀

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原位PCR儀：

PCR是提取細胞或組織中的DNA進(jìn)行基因擴增反應，而原位PCR是保持細胞或組織的完整性，使PCR反應體系滲透到組織和細胞中，在細胞的靶DNA所在的位置上進(jìn)行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA，而且還可以了解靶DNA存在于何種細胞中，更有利于探討靶DNA與細胞之間的關(guān)系。

    原位PCR儀,主要應用于：（1）檢測外源性基因片段，提高檢出率，集中在病毒感染的檢查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；（2）觀(guān)察病原體在體內分布規律（3）內源性基因片段，如人體的單基因病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRNA片段、癌基因片段等。（4）檢測導入基因；（5） 遺傳病基因檢測如β－地中海貧血。 

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀：

在普通PCR儀設計基礎上增加熒光信號采集系統和計算機分析處理系統，形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同，在PCR擴增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標記，使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過(guò)熒光信號采集系統實(shí)時(shí)采集信號連接輸送到計算機分析處理系統，得出量化的實(shí)時(shí)結果輸出。

   熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時(shí)候，選用單通道；有多種熒光標記的時(shí)候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產(chǎn)物，因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量，需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，實(shí)現一次檢測多種目的基因的功能。

   熒光定量PCR儀主要應用于臨床醫學(xué)檢測、生物醫藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。熒光定量檢測技術(shù)在臨床診斷方面很多，主要集中在各種病原體引起疾病的臨床診斷，如肝炎類(lèi)疾病、性病、與優(yōu)生優(yōu)育相關(guān)的疾病以及肺結核等等。

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