熒光定量PCR儀選購的四個(gè)要點(diǎn)

　　1、運行速度
　　
　　在熒光定量PCR儀的眾多技術(shù)參數中，升降溫速度也是廠(chǎng)家喜歡大力宣傳的指標。更快的升降溫，可以縮短反應進(jìn)行的時(shí)間，而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時(shí)間，提高PCR的特異性。為了更好的完成實(shí)驗，各個(gè)廠(chǎng)家紛紛推出能快速運行的熒光定量PCR儀。例如ROCHE推出的Lightcycler2.0利用空氣動(dòng)力學(xué)原理，可在半小時(shí)左右完成30-40個(gè)循環(huán)。ABI的7500可以選配FAST模塊擁有5°C/秒的升降溫速度，可在40分鐘左右完成30-40個(gè)循環(huán)。zui近eppendorf新推出的Mastercyclereprealplex4S和2S的銀質(zhì)模塊熒光定量PCR儀，升降溫的速度可達到6℃/秒和4.5/秒，是目前同類(lèi)產(chǎn)品中升降溫速度zui快的熒光定量PCR儀。一個(gè)在其他儀器上原本需要40—60分鐘的PCR反應，eppendorfMastercyclereprealplex4S和2S(銀質(zhì)模塊)只需運行28分鐘——別小看這節約下來(lái)的幾十分鐘，一天下來(lái)就可以多運行好幾輪了。
　　
　　2、靈活性
　　
　　大規模繁忙的實(shí)驗室設備固然讓人羨慕，但是常規實(shí)驗室同樣可以有精彩的選擇?，F在的儀器供應商擁有眾多技術(shù)專(zhuān)家，有的還能提供整個(gè)分子生物學(xué)的基礎研究平臺，不但了解、滿(mǎn)足您現在的需求，而且還考慮到了你可能變化的需求——升級和更換模塊。Bio-rad的Mycycler就可以選擇模塊升級為定量PCR儀。ABI的7900可以選擇將96孔槽變?yōu)?84孔槽。像離心式的雙通道的Rotor-gene3000A
　　
　　就可以根據您研究的需要升級成四通道的熒光定量PCR儀。Eppendorf公司在這方面考慮的就更加周全，如實(shí)驗室已經(jīng)擁有Mastercyclerep可以按照您的要求升級為Mastercyclereprealplex熒光定量PCR儀，而且可升級的型號有4種：2通道銀質(zhì)、鋁制模塊和4通道銀質(zhì)、鋁制模塊。您可以根據自己的經(jīng)費和實(shí)驗需要購買(mǎi)、升級任何一款Mastercyclereprealplex熒光定量PCR儀。
　　
　　3、儀器的檢測通量
　　
　　在購買(mǎi)定量PCR儀的時(shí)候要根據實(shí)驗實(shí)的需要來(lái)選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個(gè)多到384個(gè)。如果進(jìn)行一般的基因表達研究或病原體檢測，實(shí)在不必購買(mǎi)昂貴的儀器，96孔的通量足夠用；需要尋找要新藥靶點(diǎn)和疾病標記的實(shí)驗室可以考慮購買(mǎi)384孔板的儀器。假如經(jīng)費有限無(wú)法購買(mǎi)384孔板儀器的實(shí)驗室，可以考慮購買(mǎi)運行速度快（帶有FAST模塊）的96孔板熒光定量PCR儀。
　　
　　4、硬件設計特點(diǎn)
　　
　　熒光定量PCR儀主要有傳統的96孔板式、創(chuàng )新的離心式等，每種設計都有它的獨到之處但也都有無(wú)法避免的缺憾。
　　
　　傳統的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大，而且無(wú)需特殊的耗材。有些傳統的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測，這些光學(xué)結構在96孔板的頂部，每個(gè)樣品孔距光源和檢測器的光程各不相同——邊緣效應，對結果產(chǎn)生影響。為了保證、準確的實(shí)驗結果，這類(lèi)儀器在實(shí)驗過(guò)程中通常會(huì )使用ROX（一種熒光染料）或的Referencedye作為參照校正實(shí)驗結果。鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經(jīng)成為很多用戶(hù)頭痛的問(wèn)題。在實(shí)驗過(guò)程中鹵鎢燈作為一種熱光源，產(chǎn)生較多熱能對實(shí)驗結果有一定的影響。CCDzui大的優(yōu)點(diǎn)就是可以同時(shí)掃描所有樣品中的熒光信號，但是靈敏度較低，而且同時(shí)檢測樣品間的熒光信號存在干擾。像ABI、Bio-rad公司生產(chǎn)的熒光定量PCR就屬于這一種。但Bio-rad的IQ系列熒光定量PCR帶有梯度功能。
　　
　　創(chuàng )新的離心式的儀器通常選用LED激發(fā)、PMT檢測，離心式的設計上避免了邊緣效應。LED光源是冷光源對實(shí)驗沒(méi)有影響，因此無(wú)需采用其他熒光染料校正儀器，而且使用壽命長(cháng)無(wú)需經(jīng)常更換。PMT每次只能收集單個(gè)熒光信號，但是檢測靈敏度高。但這類(lèi)儀器運行速度非?？?，但也存在樣本量小、耗材昂貴、沒(méi)有梯度功能、存在時(shí)間積分等缺點(diǎn)。Corbett的Rotor-gene系列和Roche的Lightcycler系列均為這一類(lèi)儀器。
　　
　　隨著(zhù)熒光定量PCR技術(shù)的使用，聰明的儀器生產(chǎn)商紛紛在傳統的96孔板儀器上大作改進(jìn)。首先是Stratagene的Mx3000p在檢測上突破了使用CCD改用PMT檢測熒光信號，大大提高了實(shí)驗的靈敏度，但激發(fā)光源仍然沿用傳統的鹵鎢燈并且沒(méi)有梯度功能。Eppendorf公司推出的Mastercyclereprealplex是一款帶有梯度功能的熒光定量PCR儀，使用了96個(gè)LED為激發(fā)光源，采用先進(jìn)的CPM（第二代PMT）及96合一光纖為檢測系統，不但避免了邊緣效應還保證所有樣品間的熒光信號沒(méi)有干擾。